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NOS催化L-Arg和分子氧反应生成NO，NO与亲核性物质生成有色化合物，在530nm波长下测定吸光度，根据吸光度的大小可计算出NOS活力。

含530nm波长的分光光度计及1cm光径比色皿、37℃恒温水浴锅或气浴箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）或PBS（0.1M）、涡旋混匀器、离心管、蛋白测定试剂（组织及细胞样本用）。

• 混匀方法：将1.5mL小离心管反复颠倒，并将小离心管尖部的液体弹下来。
  
• 粉剂量较少，可能附着于管壁或盖子上，并非空管，如使用时肉眼不可见，可将其4000转/分钟离心2分钟后使用。
  
• 若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色，则不可以再用。

• 促进剂最好现用现配，配好后尽量一日内用完，如有剩余则-20℃以下保存不超过一周；未配制之前的2号促进剂和稀释液均应-20℃以下保存，如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
  
• NOS活性低，稳定性差，样品或匀浆上清如不马上检测，应置-20℃以下冷冻保存。
  
• 试剂一与配制好的试剂二应避免反复冻融。
  
• 室温低时，试剂五会出现浑浊，如果已经在测试管中加入了NOS 5号，可将测试管对着灯光，观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊，请将每只测试管37℃水浴锅中晃动5分钟，再比色。
  
• 检测范围：0.2～81.9U/mL。

• 试剂从冰箱取出，室温稳定30分钟再用，试剂四和试剂五必须澄清透亮，再进行操作，否则会影响结果。

• a^*为参考取样量及补足双蒸水的量，10%的大鼠肝组织50～100μL，鼠血清30μL，10%的大鼠肾匀浆50μL，狗血清30μL，心肌培养液100μL。
  
• 比色时注意管内有无结晶或混浊，若有结晶或混浊可放37℃水浴锅内轻轻搅动几下，混浊或结晶消失后再比色。

• 样本前处理：直接使用。
  
• 单位定义：每毫升血清每分钟催化生成1nmol NO为一个酶活力单位。
  
• 计算公式：
  

  TNOS活力 (U/mL)	＝	A测定－A空白	×	V反总	×	1	÷1000
  		ε		V样		d×T

  
  V_反总：反应液总体积，(a+2.41)mL;
  V_样：取样量，(a)mL;
  d：比色光径，cm;
  T：反应时间，15min;
  ε：呈色物消光摩尔系数，38.3×10^-6。

• 样本前处理：准确称取待测组织的重量，按重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质（推荐0.9%的生理盐水或0.1mol/L且pH值为7.0～7.4的磷酸盐缓冲液），冰水浴条件机械匀浆，4000转/分，离心10分钟，取上清液（10%匀浆上清）待测。
  
  • 匀浆上清需同步测定其蛋白浓度。
• 单位定义：每毫克组织蛋白每分钟催化生成1nmol NO为一个酶活力单位。
  
• 计算公式：
  

  TNOS活力 (U/mgprot)	＝	A测定－A空白	×	V反总	×	1	÷Cpr
  		ε		V样		d×T

  
  V_反总：反应液总体积，(a+2.41)mL;
  V_样：取样量，(a)mL;
  d：比色光径，cm;
  T：反应时间，15min;
  ε：呈色物消光摩尔系数，38.3×10^-6；
  Cpr：组织匀浆蛋白浓度，mgprot/L（prot指蛋白）。